Tamoxifen誘導(dǎo)Cre-ERT2小鼠 使用指南

Cre-ERT2小鼠是一類(lèi)含有雌激素受體的配體結(jié)合區(qū)突變體（ERT）與cre重組酶的融合蛋白表達(dá)的小鼠。Cre-ERT2在無(wú)Tamoxifen誘導(dǎo)的情況下，在細(xì)胞質(zhì)內(nèi)處于無(wú)活性狀態(tài)；當(dāng)Tamoxifen誘導(dǎo)后，Tamoxifen的代謝產(chǎn)物4-OHT（雌激素類(lèi)似物）與ERT結(jié)合，可使Cre-ERT2進(jìn)核發(fā)揮Cre重組酶活性。

Tamoxifen給藥建議如下：

3. 他莫昔芬的給藥方式

他莫昔芬可以通過(guò)腹腔注射、灌胃、飲食或飲水等途徑給藥，應(yīng)用比較廣的是腹腔注射給藥，腹腔注射的給藥劑量精準(zhǔn)，便于控制。

腹腔注射給藥流程：正確抓取小鼠，將小鼠的鼻子朝向地面，露出腹部；定位動(dòng)物的中線并將腹部分成四個(gè)象限，特別是動(dòng)物的右下象限，是腹腔注射的合適位置（右下象限缺少重要的解剖結(jié)構(gòu)）；多次腹腔注射時(shí)，應(yīng)交替注射部位。

注：Tamoxifen會(huì)影響胎兒發(fā)育和生產(chǎn)，孕鼠誘導(dǎo)的時(shí)間盡量選擇孕晚期，并同時(shí)注射孕酮來(lái)減少流產(chǎn)概率。

灌胃給藥的給藥劑量和頻率與腹腔注射相同，在正式實(shí)驗(yàn)前，建議同學(xué)們先反復(fù)練習(xí)，熟練掌握灌胃給藥的技巧。

飲食/飲水給藥使用較少，主要是他莫昔芬水溶性差，小鼠的給藥劑量不好量化，且需要的誘導(dǎo)時(shí)間較長(zhǎng)（一般需要幾周進(jìn)行誘導(dǎo)），在誘導(dǎo)期間往往還伴隨著小鼠體重的下降（約10-15%）。

4. 注意事項(xiàng)

A. 他莫昔芬注射完成后不建議立刻開(kāi)展實(shí)驗(yàn)，一般來(lái)講，停藥后需要繼續(xù)飼養(yǎng)7天，再安排后續(xù)實(shí)驗(yàn)。

B. 對(duì)照組小鼠需要同步進(jìn)行不含他莫昔芬的玉米油溶液給藥。

C. 未處理的小鼠需要和注射他莫昔芬的小鼠分籠飼養(yǎng)，小鼠舐舔到他莫昔芬懸液，梳毛等行為可能導(dǎo)致意外敲除。

D. 加熱不會(huì)導(dǎo)致Tamoxifen失效，37℃過(guò)夜溶解他莫昔芬是沒(méi)有問(wèn)題的。

最后，不同的實(shí)驗(yàn)方案、不同的小鼠品系、不同的組織器官等對(duì)于給藥劑量、給藥頻率和給藥方式等的要求往往是不同的，因此，上述方法只是一個(gè)參考，面對(duì)具體實(shí)驗(yàn)時(shí)，同學(xué)們還應(yīng)根據(jù)參考文獻(xiàn)、實(shí)驗(yàn)經(jīng)驗(yàn)先進(jìn)行預(yù)實(shí)驗(yàn)，以確定最佳方案。

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