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      小鼠單核巨噬細胞白血病細胞(RAW264.7)的培養要點及高效轉染試劑

      發布時間: 2021-07-13  點擊次數: 9515次

        小鼠單核巨噬細胞白血病細胞(RAW264.7)是通過Abelson鼠白血病病毒誘導BALB/c小鼠產生腫瘤后得到的細胞株。其在醫學研究中應用十分普遍,是許多白血病相關研究模型的常用細胞株,在微生物學、免疫學等研究中也十分常用。但RAW264.7細胞形態和分化狀態多變,在實際培養中較難把握,給科研工作帶來了一定困難;且RAW264.7細胞很難轉染,許多研究者表示Lipofectamine 2000根本轉不進去,或者僅有不到10%的轉染效率。因此RAW264.7細胞的培養及轉染方法就很值得去探討,本文就這些方面進行介紹,以供科研工作者借鑒。


      一、RAW264.7細胞的形態特征


             很多人養RAW264.7細胞時發現自己的細胞出現偽足;就連ATCC的描述也稱RAW264.7細胞形態多樣,可有圓形、類圓形,以及長出偽足的長梭形、多邊形,可單核可多核。而實際,有偽足的情況是RAW264.7細胞受到外界刺激進行了分化,是細胞衰老、分化的表現;RAW264.7細胞的“最佳"形態應是較小的單核圓形細胞。

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      二、RAW264.7細胞的培養條件

             RAW264.7細胞的培養環境與一般貼壁細胞并無差異。即培養箱溫度為37℃,CO2濃度為5%。ATCC推薦的培養基為DMEM+10%的胎牛血清;實際上,經研究者們實驗發現高糖型DMEM培養的RAW264.7細胞傳代后貼壁更快、細胞生長速度更快。因此,推薦使用高糖型DMEM,FBS濃度為10%,作為RAW264.7細胞的培養基。


      三、RAW264.7細胞的傳代

             關于RAW264.7細胞的傳代方法,ATCC推薦使用細胞刮刀。也可采用0.25%的胰酶消化或采用彎嘴吸管吹打等方法。采用細胞刮刀進行傳代時,細胞能最大限度被收集起來,但會對細胞造成機械性損傷、影響細胞形態及貼壁時間等。采用胰酶消化時,由于RAW264.7細胞貼壁較牢,消化時間就較長。但消化時間點不易把握,易消化過度,對細胞生長造成抑制。

             因此,推薦使用彎嘴吸管吹打進行傳代。具體做法是,當細胞達到傳代密度時,先棄去培養基,用預冷的PBS洗滌兩次,用彎嘴吸管吸取培養基,均勻、稍用力吹打瓶底,即可將細胞吹打下來(吹不下來的就不要了),離心后重懸即可分瓶培養。2 h后可見細胞貼壁。


      由于RAW264.7細胞生長速度較快,一般1-2d換液1次,密度長至60%-70%左右即可傳代,傳代比例可為1:3-1:6。若傳代間隔太久,細胞生長密度過大,細胞也容易發生分化,出現長偽足的多形細胞。


      四、RAW264.7細胞的凍存及復蘇

             RAW264.7細胞的凍存及復蘇方法與一般貼壁細胞并無較大差別。但由于RAW264.7細胞對外界刺激較敏感,對營養條件要求較高,許多人建議降低DMSO的濃度,增加FBS血清的濃度。因此凍存液的推薦配方為5% DMSO和20% FBS的培養基(小鼠單核巨噬細胞白血病細胞的培養及其在誘導破骨細胞中的應用,許丹等,中國骨質疏松雜志,2016, 10, 22, 10)。

       

      五、RAW264.7細胞的轉染

      (一)以往轉染數據


            RAW264.7細胞是一種巨噬細胞,有很強的貼壁性和偽足產生性,其轉染較難,一般采用電轉或慢病毒穩轉的方法。有研究者對RAW264.7細胞用幾種不同的轉染方法進行處理,對轉染效率進行比較。結果發現,脂質體轉染(Lipofectamine 2000, Invitrogen)效率很低,僅為12.17±1.53%,慢病毒轉染效率是最高,可達34.75 ± 5.30%,羅氏轉染(X-treme GENE HP DNA Transfection Reagent, Roche)和電穿孔轉染效率分別為16.52 ± 3.86%和15.73 ± 3.29%(巨噬細胞RAW264.7不同轉染方法的比較,李亞等,生物技術,2014, 24, 2)。

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      (二)最新高效轉染試劑

             既然RAW264.7細胞這么難轉染,實驗還得繼續,那怎么辦呢?

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             目前ZETA LIFE新推出一款Advanced系列高效DNA、RNA轉染試劑。其廣泛適用于貼壁細胞和懸浮細胞的轉染,可轉DNA、RNA,也可共轉染,還可進行小動物活體轉染。

      這一款轉染試劑有以下幾個特點:

       

             1.適用細胞廣


             廣泛用于293T,9L,A172, A375, A549, COS7, CHO-K1, C6S, C2C12, NIH3T3, RG2, T98G, U87, U118, MDCK, MCF-7, HT1080, HEK, H4, RAW264.7等多種細胞系。

       

            2.細胞毒性低


            其最高細胞存活率可高達98%,平均細胞存活率可達80%。

       

             3.轉染效率高

             其最高轉染效率可高達96%,平均轉染效率可達70%。

       

      (三)Advanced系列高效DNA、RNA轉染試劑轉染質粒進RAW264.7的實例(來自實驗者的實際數據)

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      由上圖可明顯看出Advanced系列高效DNA、RNA轉染試劑對RAW264.7轉質粒的轉染效率高達95%以上,且細胞存活率較高。

       

             相信Advanced系列高效DNA、RNA轉染試劑 將是您對的選擇,希望能為您的研究助力。

      Zeta Life高效Advanced DNA RNA轉染試劑系列:                     

      品牌:美國Zeta Life  貨號:AD600025  (Zeta Life原代細胞轉染試劑)0.25ml/1590元

      品牌:美國Zeta Life  貨號:AD600050  (Zeta Life真核細胞轉染試劑)0.5ml/2390元

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      品牌:美國Zeta Life  貨號:AD600500  (Zeta Life懸浮細胞轉染試劑)5ml/14580元

      品牌:美國Zeta Life  貨號:AD601000  (Zeta LifeRAW264.7細胞轉染試劑)10ml/27480元

                                                              

       

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