蛋白免疫檢測技術

蛋白免疫檢測技術是基于抗原與抗體特異性結合的原理，用于檢測生物樣品中蛋白質的存在、含量、分布及相互作用的一類分析技術。這類技術具有高特異性、高靈敏度等特點，廣泛應用于醫學診斷、生物學研究、藥物開發等領域。以下是幾種常見的蛋白免疫檢測技術及其原理、應用和特點：

一、酶聯免疫吸附測定（ELISA）

原理

將抗原或抗體固定在固相載體（如微孔板）表面，通過酶標記的抗原或抗體與待測樣品中的目標蛋白結合，加入底物后酶催化顯色反應，通過吸光度值定量分析目標蛋白。

類型

1. 直接法：標記抗體直接結合抗原。

2. 間接法：用未標記的一抗結合抗原，再用酶標記的二抗檢測一抗。

3. 夾心法：用捕獲抗體固定抗原，再用酶標記的檢測抗體結合抗原，適用于雙表位抗原的定量。

4. 競爭法：待測抗原與標記抗原競爭結合抗體，用于小分子抗原檢測。

應用

• 醫學診斷：檢測病原體抗體（如 HIV、乙肝病毒）、腫瘤標志物（如 CEA）。

• 科研：細胞因子、激素等微量蛋白的定量分析。

點

靈敏度高（pg-ng 級）、操作簡便、可高通量檢測。

缺點

可能存在非特異性結合，需設置嚴格對照；僅能檢測可溶性蛋白。

二、免疫印跡法（Western Blot，WB）

原理

1. 電泳分離：通過 SDS-PAGE 電泳按分子量分離蛋白樣品。

2. 轉膜：將蛋白轉移到固相膜（如 PVDF 膜、硝酸纖維素膜）上。

3. 免疫反應：用一抗和酶 / 熒光標記的二抗結合目標蛋白，通過化學發光或顯色劑顯影。

   
   

應用

• 驗證蛋白表達（定性或半定量），分析蛋白分子量及修飾（如磷酸化、糖基化）。

• 檢測細胞或組織中的特異性蛋白（如癌癥相關蛋白）。

  
  

優點

缺點

操作步驟繁瑣，耗時較長；定量準確性低于 ELISA。

三、免疫熒光技術（Immunofluorescence，IF）

原理

用熒光素（如 FITC、Alexa Fluor）標記抗體，與細胞或組織中的目標蛋白結合，通過熒光顯微鏡或共聚焦顯微鏡觀察熒光信號，定位蛋白在細胞內的分布（如細胞膜、細胞質、細胞核）。

類型

• 直接免疫熒光：標記一抗直接結合抗原。

• 間接免疫熒光：未標記一抗結合抗原，再用熒光標記的二抗檢測，信號更放大。

  
  

應用

• 細胞生物學：研究蛋白亞細胞定位、動態變化（如細胞骨架蛋白、受體分布）。

• 自身抗體檢測：如抗核抗體（ANA）的熒光顯微鏡診斷。

  
  

優點

直觀顯示蛋白空間分布，可實現多色標記（同時檢測多種蛋白）。

缺點

需熒光顯微鏡，樣品制備要求高；熒光信號可能隨時間衰減。

四、免疫組織化學技術（Immunohistochemistry，IHC）

原理

將組織樣本制成切片（如石蠟切片、冰凍切片），用抗體檢測組織中目標蛋白的定位和表達水平，通過酶顯色（如 DAB 顯色呈棕黃色）或熒光標記顯示結果。

應用

• 病理診斷：鑒別腫瘤類型（如乳腺癌 ER/PR 檢測）、判斷預后（如 Ki-67 增殖指數）。

• 研究組織中蛋白的分布特征（如炎癥因子在組織中的表達）。

  
  

優點

保留組織形態學結構，便于結合病理特征分析。

缺點

結果判讀依賴經驗，定量準確性較低。

五、免疫沉淀（Immunoprecipitation，IP）

原理

應用

• 研究蛋白 - 蛋白相互作用（如免疫共沉淀 Co-IP）。

• 富集低豐度蛋白，用于結構或功能研究。

優點

缺點

需高親和力抗體，操作需優化避免非特異性結合。

六、流式細胞術（Flow Cytometry，FCM）

原理

應用

• 免疫學：免疫細胞分型（如 T 細胞亞群 CD4+/CD8 + 檢測）。

• 癌癥研究：細胞周期、凋亡相關蛋白分析。

優點

缺點

需流式細胞儀，樣品需制備成單細胞懸液。

七、化學發光免疫分析（CLIA）

原理

應用

臨床檢測：激素（如甲狀腺激素）、腫瘤標志物的高靈敏度定量。

優點

靈敏度高于 ELISA（fg 級），自動化程度高，適合大規模檢測。

技術發展趨勢

1. 多重檢測：如流式細胞術、多色免疫熒光可同時檢測多種蛋白。

2. 自動化與高通量：ELISA、CLIA 的全自動檢測平臺提高效率。

3. 高分辨率成像：超分辨率顯微鏡結合免疫熒光技術，解析蛋白納米級分布。

4. 單細胞技術：單細胞免疫熒光、流式細胞術實現單細胞水平異質性分析。

這些技術各有側重，實際應用中需根據檢測目的（定性 / 定量 / 定位）、樣品類型（細胞 / 組織 / 體液）及靈敏度要求選擇合適的方法，或結合多種技術進行綜合分析。

安培生物致力成為推動生命科學進步值得信賴的合作者

深圳/湛江安培生物科技有限公司,是一家具有核心的技術實力、先進的經營管理水平和完善的市場銷售體系的生物高科技企業?？偛吭O在廣東，服務面向全國。安培生物集進口試劑、實驗室耗材銷售、技術服務與合約開發為一體的專業化高科技公司，旨在為生命科學的發展提供較好的產品與服務。本公司建立了涵蓋分子生物學、細胞生物學、免疫學、信號傳導和神經科學等領域的產品供應線，在各個領域內向用戶提供較高的水平和質量穩定的產品，安培生物致力于為廣大的科研機構、高等院校等客戶提供各種產品、技術支持與服務。可以在第一時間為用戶提供比較先進的專業資訊和完備的產品和物流服務。 專業的技術力量使得我們能夠為廣大用戶提供強大的技術支持，深厚的人脈資源使得我們在全國主要城市擁有眾多的合作伙伴，安培生物非常榮幸能將世界上先進的高科技產品推薦給國內從事生物學領域科研的老師和同仁。作為專業性的產品供應商，公司出資存備了大量現貨，配合優秀的銷售隊伍以及專業的技術支持，隨時為客戶提供服務