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細胞結構中的神奇細胞器：脂滴
發布時間： 2024-01-30 點擊次數： 2400次今天我們要來聊一下細胞結構里面的一個神秘小東西-脂滴
沒錯沒錯，你沒看錯！這就是那些小小的圓圓的、像是浸泡在脂肪里的小球球！它們的外觀看起來就像是脂肪掉進了細胞里，而且它們還有著各種神奇的功能。
那么，脂滴到底是什么呢？它們是由一種叫做“脂質"的化學物質組成的。脂滴是脂質和能力穩態中心的儲存細胞器。它們具有不一樣的結構，由中性脂質的疏水核心組成，該核心由磷脂單層包圍，磷脂單層由一組特定的蛋白質修飾。脂質本質上就是脂肪酸和甘油的混合物，它們在細胞里的主要功能就是作為能量儲備。
脂滴不僅僅是細胞內的能量儲備庫，它們還可以幫助細胞進行重要的功能。如蛋白質降解、隔離轉錄因子和染色質成分以及為某些核受體生成脂質配體。此外，病毒核衣殼蛋白核心本身可與脂滴表面結合并協調病毒感染的持續傳播。它們可以幫助調節細胞內的代謝過程，幫助細胞在不同的生理狀態下更好地運作。此外，脂滴還可以作為一種儲存信號分子的地方，這些信號分子可以在需要的時候釋放出來，幫助細胞完成一些復雜的生化反應。
脂滴看起來很小，但它們在細胞內的重要性不可小覷。當人體內能量供應充足的時候，脂滴會不斷地增加，以儲備能量；而當人體需要能量的時候，脂滴又會迅速地釋放出來，為身體提供能量支持。
那么，脂滴在我們的身體里面到底長什么樣呢？其實，它們的外觀有點像一個個小圓球，通常都位于細胞的中央區域，但也會分布在整個細胞內。如果你有看過一些細胞結構的圖像的話，你會發現，脂滴通常會在圖像上顯示成一個個小點點，而且數量通常也很多。小小脂滴如何檢測呢？
1. C11 BODIPY 581/591
C11 BODIPY 581/591 (Catalog No.: GC40165) 是一種 BODIPY 氟硼熒衍生物，具有良好的光穩定性、低熒光偽影特質。C11 BODIPY 581/591 常用于活細胞內脂質過氧化比率和抗氧化性能的研究，或與羥基自由基反應、檢測鐵死亡 (ferroptosis)。C11 BODIPY 581/591 發射波長為 591 nm (還原型)，或紅移至 510 nm (氧化型)；激發波長分別為 581 nm (還原型)、500 nm (氧化型)。
1. 細胞制備：
懸浮細胞：離心收集細胞，加入 PBS 洗滌兩次，每次 5 分鐘。
貼壁細胞：棄去培養基，加入胰蛋白酶消化細胞。離心棄去上清后，加入 PBS 洗滌兩次，每次 5 分鐘。
2. 加入 1 mL C11 BODIPY 581/591 工作液，室溫孵育 15 分鐘。
3. 400 g，4℃ 離心 3-4 分鐘，棄去上清。
4. 加入 PBS 洗滌細胞兩次，每次 5 分鐘。
5. 用熒光顯微鏡拍照，設置氧化型的激發光和發射光分別為460–495nm 和 510–550nm。還原型激發光和發射光分別為565–581nm和 585–591nm。
2. BODIPY 493/503
BODIPY 493/503 (Catalog No.: GC42959) 是一種親脂性熒光染料，發出亮綠色熒光，已廣泛用于脂質滴標記（Ex/Em:493/503 nm）。BODIPY 493/503與熒光、共焦和雙光子顯微鏡以及流式細胞儀兼容，可用于活細胞和固定細胞。
1. 在與研究相關的培養條件下培養細胞。 （例如，35 mm 孔中有 50,000 個 A498 細胞。）
注意：細胞與 30 μM 油酸一起孵育過夜可作為增加中性脂質含量的陽性對照，因為油酸是甘油三酯合成和儲存的有效誘導劑。 不含脂肪酸的 BSA 作為對照。
2. 在感興趣的時間點，在 PBS 中制備 2 μM BODIPY 493/503 染色溶液。
3. 使用 3 ml PBS 快速漂洗細胞以去除培養基/血清。
4. 在 BODIPY 493/503 染色液中于 37 °C 避光孵育 15 分鐘。 包括用于流式細胞術的未染色控制。
5. 使用 3 ml PBS 快速漂洗細胞以去除染色液。
6. 用胰蛋白酶消化細胞以產生單細胞懸液。 對于本協議中使用的 A498 細胞系，細胞在 37°C 下與胰蛋白酶-EDTA（0.25%）孵育 5 分鐘。
7. 加入 5 ml PBS 并將細胞懸液轉移到 15 ml 錐形管中。
8. 以 250×g、5 分鐘、4 °C 沉淀細胞。
9. 吸出上清液，用 3 ml PBS 快速漂洗細胞沉淀，并以 250 × g，5 分鐘，4 °C 沉淀細胞。
10. 小心吸出上清液并在 300 μl 1x 流式細胞術緩沖液中重懸細胞。
11. 將細胞懸液通過 35 μm 過濾器放入 FACS 管中。
12. 進行流式細胞術。 每個條件至少獲得 10,000 個事件。
13. 將數據分析為平均熒光或將數據顯示為直方圖。
3. Oil Red O
油紅 O （Catalog No.:GC25676）是一種溶血色素（脂溶性染料）重氮染料，用于冷凍切片上的中性甘油三酯和脂質以及石蠟切片上的一些脂蛋白的染色。 它具有紅色粉末的外觀，最大吸光度為 518 納米。
1. 制備儲存液
0.1 g 油紅 O 溶于 20 mL 丙二醇。
2.細胞染色
2.1 將冷凍切片的組織載玻片風干并用 4% 多聚甲醛固定。
2.2在室溫下用油紅 O 溶液染色 30 分鐘。
2.3 用蒸餾水沖洗 10 分鐘。
2.4 載玻片用明礬蘇木精輕輕染色 1 分鐘。
2.5用蒸餾水沖洗，并安裝用于顯微鏡檢查。
4. 其他脂滴熒光探針
Cat.No.
Product Name
Information
GC42964
BODIPY-Cholesterol BODIPY-cholesterol is a biologically active and cel-permeable analog of cholesterol that is tagged with a fluorescent BODIPY group at carbon 24.
GC42249
3-BODIPY-propanoylaminocaproic Acid N-hydroxysuccinimide ester
3-BODIPY-propanoylaminocaproic acid N-hydroxysuccinimide ester (BODIPY FL-X SE) is an amine-reactivefluorescent probe.
GC44574
PBD-BODIPY
PBD-BODIPY is a probe for the spectrophotometric measurement of autoxidation reactions.
GC42960
BODIPY 505/515
BODIPY 505/515, a lipophilic fluorescence dye, emits fluorescence has been used extensively for lipid droplet labeling (Ex/Em: 505/515 nm).
GC42963
BODIPY-C12 Ceramide (d18:1/12:0)
BODIPY-C12 Ceramide (B12Cer) is a fluorescently-tagged form of C12 ceramide that displays excitation/emission maxima of 505/540 nm, respectively.
GC42962
BODIPY 630/650X succinimide ester
BODIPY 630/650X succinimide ester is a fluorescent conjugate of the adenosine receptor ligand N-ethylcarboxamido-adenosine (NECA).
GC42959
BODIPY 493/503
BODIPY 493/503, a lipophilic fluorescence dye, emits bright green fluorescence has been used extensively for lipid droplet labeling (Ex/Em: 493/503 nm).
GC40165
C11 BODIPY 581/591
C11-BODIPY581/591 is a fluorescent ratio-probe of lipid oxidation.
GC42961
BODIPY 558/568 C12
BODIPY 558/568 C12 is a fatty acid-conjugated fluorescent probe for lipid droplets.
所以，小伙伴們，現在你們已經知道了脂滴是什么了，它們是細胞內的重要組成部分，不僅僅是能量儲備庫，還能幫助細胞完成很多生物學功能。是不是覺得很神奇呢？趕快去看看你身邊的細胞，是不是也有一些小小的圓圓的小球球在里面跳。
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