血清沉淀知多少

血清沉淀是什么？

血清中經(jīng)常會出現(xiàn)肉眼可見的沉淀，其成分有多種類型，產(chǎn)生的原因有很多，主要有纖維蛋白、磷酸鈣還有一些其它成分。

1. 纖維蛋白（Fibrin）

血清中肉眼可見的沉淀物大多屬于這一類型。由于在生產(chǎn)過程中，血清采集、過濾（3 次 0.1 μm過濾）和灌裝處理都是在低溫條件下快速完成, 此時(shí)血清中纖維蛋白原（Fibrinogen）處于溶解狀態(tài)。但在解凍之后, 血清中纖維蛋白原往往會發(fā)生凝集，形成肉眼可見的沉淀。

2. 磷酸鈣（Calcium Phosphate）

這是一種常見的沉淀成分，通常會造成血清出現(xiàn)云霧狀渾濁。當(dāng)產(chǎn)品在 37℃保存時(shí)，這種現(xiàn)象尤其明顯，在倒置顯微鏡下可觀察到小黑點(diǎn)的存在。這些小黑點(diǎn)在布朗運(yùn)動的作用下四處游動，常被誤認(rèn)為是微生物污染。

3. 其他成分（Other） 

血清中的其他成分也會形成沉淀，例如膽固醇形成的油脂滴和其他蛋白沉淀等。

血清沉淀會影響細(xì)胞培養(yǎng)嗎？

1. 細(xì)胞生長

我們在出廠前都會對血清進(jìn)行一系列質(zhì)檢測試，確保血清質(zhì)量達(dá)到嚴(yán)格標(biāo)準(zhǔn)。血清測試和細(xì)胞培養(yǎng)經(jīng)驗(yàn)也表明，其沉淀成分不會影響血清作為細(xì)胞培養(yǎng)添加物的表現(xiàn)。這一點(diǎn)得到了眾多客戶和其他血清供應(yīng)商的肯定。解凍之后, 血清中纖維蛋白原往往會發(fā)生凝集，形成肉眼可見的沉淀。

2. 懷疑污染

磷酸鈣顆粒經(jīng)常會被當(dāng)成微生物污染而引發(fā)不必要的擔(dān)憂。一般情況下，當(dāng)操作人員融化血清后注意到有霧狀渾濁時(shí)，常將其存放在 4℃冰箱中觀察，并考慮接下來是否繼續(xù)使用。但這樣會使沉淀進(jìn)一步增多，反而會使血清更加渾濁，進(jìn)而誤以為存在血清污染。并且，在倒置顯微鏡下，可在血清中觀察到四處游動的小黑點(diǎn)（磷酸鈣顆粒的布朗運(yùn)動），更容易使人誤以為存在微生物污染。

為防止這類誤解的產(chǎn)生，我們不建議客戶培養(yǎng)血清來驗(yàn)證是否存在污染，而是將血清直接接種在細(xì)菌培養(yǎng)基上進(jìn)行培養(yǎng)，以觀察是否有細(xì)菌的增殖。并且，進(jìn)行革蘭氏染色，并在油鏡（100 X 10 倍）下觀察可直接確認(rèn)是否存在微生物污染。

怎樣操作可以盡量避免沉淀出現(xiàn)？

1. 正確解凍

首先，應(yīng)按照逐步解凍的方式正確解凍血清：從-20℃取出后，置于 4℃冰箱緩慢解凍，最后置于室溫完成解凍。如果直接從-20℃拿到室溫或 37 ℃水浴解凍，則非常容易產(chǎn)生沉淀。在解凍過程中，請注意時(shí)不時(shí)緩慢搖晃瓶子，減少沉淀的產(chǎn)生。為避免反復(fù)凍融，建議您將血清分裝使用。

2. 使用和保存注意事項(xiàng)

血清沉淀很難預(yù)測和避免，出現(xiàn)沉淀后也無需擔(dān)憂，這并不會影響血清的品質(zhì)。已知血清沉淀在以下條件下會有增多的可能：

1) 熱滅活；

2) 37℃培養(yǎng)；

3) 反復(fù)凍融；

4) 伽馬射線照射； 

5) 2-8℃長期保存； 

6) 長期保存于可自動化霜的冰箱中（溫度不穩(wěn)定）。

血清沉淀的形成機(jī)理多種多樣，具體的機(jī)理尚不十分明確。我們尚不能準(zhǔn)確預(yù)測和控制血清沉淀的產(chǎn)生。目前市面上所有品牌的血清產(chǎn)品都存在沉淀現(xiàn)象，這一點(diǎn)可以在各品牌網(wǎng)站上關(guān)于沉淀問題的聲明上得到證實(shí)。

出現(xiàn)血清沉淀該如何處理？

若想去除沉淀，我們建議您采用2000 rpm 離心5分鐘，或用0.45 μm的過濾器去除沉淀。

總結(jié)：

血清產(chǎn)品中出現(xiàn)沉淀于常見現(xiàn)象，無需過多擔(dān)心，并且不會響血清的品質(zhì)，對細(xì)胞培養(yǎng)而言也是沒有任何問題的，大家可以放心使用。

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