血管形成實驗容易出現的BUG

      血管生長是腫瘤發生的關鍵步驟。通過抑制腫瘤血管生成來阻止腫瘤發展和轉移合乎邏輯。

      血管生成(angiogenesis)是生殖、生長發育和修復的基礎。腫瘤無新生血管時,直徑很少超過2 mm-3 mm,其生長處于休眠狀態。當腫瘤原發灶或轉移灶長大到一定程度,氧及營養供應和代謝產物的排出就出現不足。一旦血管長入腫瘤,供給腫瘤組織營養和氧的方式由周邊彌散變成血液灌注,其代謝產物也能在血液循環時徹-底清除。腫瘤血管不僅為腫瘤提供營養和氧,運走代謝產物,還決定腫瘤的病理生理、生長、侵襲、轉移和對各種治療的反應 。該觀點于1971年經Folkman梳理,加之隨后血管生長因子被發現,這個問題受到學術界極大重視,相關藥物研究也隨之蓬勃發展。

      腫瘤血管生成包括了以下五種方式 。血管生成 (angiogenesis)即腫瘤組織在原有微血管網的基礎上通 過“芽生"方式形成新血管;血管發生(vasculogenesis) 即血液或骨髓來源的內皮祖細胞形成新血管;血管套疊 (intussusception)即間質組織摻入到已有的血管參與腫瘤血管的構成;馬賽克血管(mosaic vessel)即內皮細胞和分散的腫瘤細胞本身相間排列組成血管;血管生成擬態(vasculogenic mimicry)即腫瘤細胞模擬并取代內皮細胞形成管腔樣結構。 

      體外的血管形成實驗成為研究的熱點，目前血管形成實驗一般都采用內皮細胞結合條件培養基或結合腫瘤細胞并接種于基底上就形成了三維網狀結構，觀察其形成的結構，之后通過各種軟件進行定量分析。目前做的比較多的是內皮的小管形成：

1. 內皮的代數不能太多，若是HUVEC ，HMEC-1等細胞系去做此類的實驗，建議細胞的代次控制在7代內，若細胞形態不好，與鋪板成管的關系會很大，所以在做實驗時，一定要在細胞具有最佳生長狀態，最佳形態，并且無任何污染的情況下鋪板，細胞盡量鋪勻，要不然做出來的小管可能會存在斷點。

2. 原代內皮細胞做小管實驗，因為內皮細胞分離并不是想象中的剝下來就是內皮的那么簡單，比如Cell Systems的原代細胞分離的標準就有很具體的說明，細胞在P0的時候，基本是有雜質的，然后需要進行磁珠篩選或者酶消化一次，（cell systems的細胞為了讓科研用戶的實驗更不受抗體影響，一般不采用抗體篩選，這樣原代細胞在純化之后不會帶任何抗性，影響實驗最終的結果）所以原代的內皮在做小管實驗的時候盡量控制傳代的次數，最好做一個傳代的極限測試，然后再根據結果復蘇細胞進行實驗。

3. 鋪板基質膠的時候一定要注意：感覺這個玩意一定要好的品牌，好的品牌還挺貴的，所以不能浪費，鋪膠前可以用無血清的培養基先稀釋，一般是1：2左右；（建議不稀釋用的心痛，稀釋太大怕成不了管的心理的同學可以嘗試一下）膠一個96 孔板一般是50ul左右，土豪可以試試24孔板鋪膠，相比下來面積更大，拍照的地兒也多，可以各種POSE擺起來，大佬可以試試血管生成的培養皿，這玩意簡單省事，直接把細胞往上一蓋，坐等美圖自動生成。

需要注意的點：配制試劑時，不要產生氣泡；加細胞懸液時，不要讓槍頭觸碰基質膠，

4. 鋪細胞的密度要控制好，狀態和密度息息相關，若當心細胞不成管可以給它來點生長因子如EGF,VEGF等。

5. 拍照的時間一定要掌握好，千萬不能睡過頭，一般內皮細胞在鋪板后12小時開始成管，24小時后開始崩解；

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