細(xì)胞污染如何識(shí)別？

在培養(yǎng)細(xì)胞過(guò)程中，同學(xué)們最擔(dān)心的就是細(xì)胞污染。因此，今天給大家分享如何辨別細(xì)胞污染的經(jīng)驗(yàn)，趕快學(xué)起來(lái)吧~

一、肉眼觀察

把培養(yǎng)瓶或培養(yǎng)皿拿起來(lái)，對(duì)者光線檢查

●渾濁情況：即使細(xì)胞密度很高，培養(yǎng)基也應(yīng)該是透明的。輕輕移動(dòng)或晃動(dòng)培養(yǎng)瓶，觀察培養(yǎng)基的渾濁或懸浮情況，一些霉菌可能會(huì)在培養(yǎng)基的表面形成菌落。

●培養(yǎng)基顏色的變化。酸性條件下，加了酚紅的培養(yǎng)基會(huì)由紅變黃，而堿性條件下會(huì)變成紅紫色。細(xì)菌污染常常會(huì)使培養(yǎng)基變成黃色，真菌污染會(huì)使培養(yǎng)基變成深紫紅色。

注意：丟掉細(xì)胞以前要仔細(xì)檢查一下，快速生長(zhǎng)和生長(zhǎng)過(guò)量的細(xì)胞培養(yǎng)基也會(huì)變黃。當(dāng)培養(yǎng)箱中CO2的濃度變化時(shí)培養(yǎng)基的顏色也會(huì)變成黃色（CO2濃度太高）或是粉紅色（CO2 濃度太低）。

●聞！當(dāng)然不能打開(kāi)瓶子去聞，把鼻子貼在瓶口聞，許多污染發(fā)生以后都會(huì)散發(fā)出易察覺(jué)的、特殊的氣味，甚至打開(kāi)培養(yǎng)箱門就聞到了。

二、顯微觀察

在倒置顯微鏡下，先用低倍（10x）再用高倍（40x）物鏡（總放大倍數(shù)為400）觀察細(xì)胞培養(yǎng)皿或培養(yǎng)瓶中的細(xì)胞：

●其他有機(jī)體：在低倍鏡下，真菌的菌絲體成長(zhǎng)棒狀，并橫穿整個(gè)視野，還可以觀察到酵母，有時(shí)呈小圓球形，有時(shí)還有芽。

在高倍鏡下可以觀察到細(xì)菌，它們可能是棒狀或球狀，單獨(dú)成鏈或成團(tuán)存在，它們也可能和細(xì)胞混在一起，并且明顯處于細(xì)胞內(nèi)部，有些細(xì)胞可能已經(jīng)裂解變得模糊。觀察時(shí)可能每?jī)蓚€(gè)視野才出現(xiàn)一個(gè)污染（當(dāng)然也算被污染了！），而且可能污染物是可以運(yùn)動(dòng)的。

●損傷細(xì)胞：感染會(huì)殺死細(xì)胞，可能導(dǎo)致每個(gè)細(xì)胞都裂解/細(xì)胞層從附著物上全剝離，更可能的是細(xì)胞變得不規(guī)則（或大或小），在低倍鏡下是黑色的粒狀。

（1）懸浮細(xì)胞

懸浮培養(yǎng)細(xì)胞比貼壁培養(yǎng)細(xì)胞更加難以顯微觀察，尤其是高倍顯微鏡下。

●將培養(yǎng)瓶或培養(yǎng)皿放在顯微鏡的載物臺(tái)上，靜置一會(huì)。將焦距對(duì)準(zhǔn)器皿的底部，觀察那些輕微附著的細(xì)胞，因?yàn)樗鼈兛赡芤呀?jīng)接觸到了微生物。

●對(duì)準(zhǔn)整個(gè)培養(yǎng)瓶焦距， 當(dāng)發(fā)現(xiàn)細(xì)胞的時(shí)候，用細(xì)聚焦調(diào)節(jié)旋鈕調(diào)節(jié)，仔細(xì)檢查周圍的培養(yǎng)基有沒(méi)有污染發(fā)生。

（2）貼壁細(xì)胞

三、制片觀察法

如果你不能確定是否發(fā)生了污染

●制作濕涂片或染色片：取1 ml培養(yǎng)基離心，用50μl培養(yǎng)基或緩沖液重新懸浮細(xì)胞，滴一滴到載玻片，蓋上蓋玻片制成濕涂片；或涂片、固定并染色（甲基蘭或革蘭氏染液），在高倍鏡下觀察。

●將細(xì)胞在營(yíng)養(yǎng)培養(yǎng)基或血瓊脂培養(yǎng)基上劃線，37℃培養(yǎng)3天。如果有菌落，那么細(xì)胞被污染了。

●取1 ml的細(xì)胞培養(yǎng)液至無(wú)菌的微量離心管中，37℃培養(yǎng)3天。觀察到渾濁物，做濕涂片顯微鏡觀察。

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