銷售熱線

    19126518388
    • 技術(shù)文章ARTICLE

      您當(dāng)前的位置:首頁 > 技術(shù)文章 > 誘導(dǎo)與檢測方法

      誘導(dǎo)與檢測方法

      發(fā)布時間: 2022-02-28  點擊次數(shù): 1544次

      同學(xué)A:


      使用細胞細胞包被液包被細胞培養(yǎng)板,將傳代或復(fù)蘇凍存的人間充質(zhì)干細胞接種到6孔板上,密度為2×105 -3×105 cells/cm2或2×105 -3×105 cells/孔,置于37℃,5% CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng),當(dāng)細胞匯合度達到80%-90%時,小心的將孔內(nèi)間充質(zhì)干細胞培養(yǎng)基吸掉,向6孔板中加入2mL人間充質(zhì)干細胞脂肪分化培養(yǎng)基(此套裝包含基礎(chǔ)500ml,脂肪細胞分化因子:5ml,干細胞生長維持因子:5ml,胎牛血清:25ml ),以此記為第0天。



      一、細胞誘導(dǎo)前可使用多聚賴氨酸溶液進行細胞包被,以便細胞更好的進行貼壁。



      二、每隔1-2天更換新鮮的人間充質(zhì)干細胞脂肪分化培養(yǎng)基;

      注意:為防止脂肪細胞脫落,建議誘導(dǎo)過程中出現(xiàn)大量脂肪細胞結(jié)節(jié)之后,換液形式變?yōu)槊刻煲淮伟肓繐Q液。


      三、 誘導(dǎo)14-21天期間,視細胞的形態(tài)變化及生長情況進行染色。







      以下是總結(jié)的染色方法     

      脂肪油紅染色,有的是動物/人體脂肪組織切片,或細胞爬片。各有操作稍有差異。


      *成熟飽滿的脂肪細胞,容易破裂,脂滴泄漏,所以壓片,切片都要考慮到這個問題。 


      細胞爬片細胞溶液脫落,特別是脂滴大的。操作務(wù)必要輕柔。不要把細胞沖掉。


      如果做脂肪組織冰凍切片,冰凍切片要適當(dāng)厚一些,一般為10-15µm,切片太薄容易導(dǎo)致脂肪流失


      如果培養(yǎng)載體為塑料制品,hoechst33342染核的話,塑料板自發(fā)熒光也為藍色,必須考慮波長,激發(fā)波長/發(fā)射波長=485nm/572nm



      誘導(dǎo)的小鼠MMSC-BM的成脂肪細胞

      染色步驟:

      (1) 先小心輕緩倒去培養(yǎng)液。 
      (2) 用pbs輕緩漂洗。
      (3)加10%中性甲醛或者95%以上的酒精固定30min以上
      (4) 稀釋改良型即用油紅染色試劑盒,油紅:PBS=3:2,室溫放置10min
      (5)染色10-20min左右,加的體積覆蓋住板底即可,如6孔加1.5ml,24孔加0.5-1ml。
      (6)脫色,用75%酒精/60%異丙醇漂洗,除去多余的染料

      (7) 復(fù)染,淡蘇木染色1/5分鐘,pbs漂洗(這一步不做也可,看試驗需要,并且蘇木素會把胞漿染紅,如要顯示核, hoechst33342也可以,濃度5微克/毫升染10分鐘即可把核染上)。
      (8)甘油明膠封片(封片后可長期保存)。

      (9) 若不用明膠封片,請盡快拍照。


      同學(xué)B:

      油紅O染色試劑盒在傳代培養(yǎng)中,接種密度是影響體外培養(yǎng)間質(zhì)干細胞增殖潛能的重要因素。低密度接種時,間質(zhì)干細胞的增殖能力明顯提高,而誘導(dǎo)細胞分化時則需要較高的細胞密度,這可能與分化時細胞與細胞間的相互作用有關(guān)。而在培養(yǎng)過程中,若細胞過度融合會促進其分化趨向,故要保持干細胞未分化狀態(tài),要及時傳代。


      以上就是本期的內(nèi)容,更多資訊,歡迎點擊安培生物網(wǎng)站鏈接了解更多技術(shù)與產(chǎn)品資訊

       

      安培生物科技有限公司介紹:

      安培生物堅持為生命科學(xué)研究、活體動物轉(zhuǎn)染、大規(guī)模生物生產(chǎn)、基因和細胞治療領(lǐng)域客戶,提供*細胞體內(nèi)可代謝的核酸轉(zhuǎn)染試劑;inviCELL™Platelet lysate無動物血清產(chǎn)品旨在支持廣泛的細胞擴增和生產(chǎn),包括培養(yǎng)間充質(zhì)干細胞和多種免疫細胞系等,為制藥公司或者生物技術(shù)公司提供無血清細胞培養(yǎng)規(guī)模生產(chǎn)服務(wù);提供以植物生物為平臺基因序列全人源化、*的細胞培養(yǎng)可分解3D基質(zhì)膠產(chǎn)品;提供內(nèi)毒素≦ 1.0 EU/mL、對細胞無毒性影響、高純度的一型膠原蛋白產(chǎn)品。安培生物專注為生物醫(yī)藥領(lǐng)域提供優(yōu)質(zhì)的產(chǎn)品和技術(shù)服務(wù),努力發(fā)展為基因治療、細胞治療的生物科技企業(yè)。




    產(chǎn)品中心 Products
    久久国产精久久精产国| 一本色道久久综合狠狠躁篇| 狠狠色婷婷久久一区二区| 亚洲精品午夜国产va久久| 国产成年无码久久久久毛片| 成人影院久久久久久影院| 久久久久成人精品无码中文字幕 | 少妇高潮喷潮久久久影院| 亚洲成色999久久网站| 久久久久99精品成人片| 久久久精品天堂无码中文字幕 | 久久国产免费观看精品3| 亚洲精品tv久久久久久久久| 国产精品99久久久| 亚洲综合久久一本伊伊区| 久久久亚洲欧洲日产国码农村| 久久一区二区免费播放| 国产成人综合久久| 69久久夜色精品国产69| 99久久久国产精品免费牛牛| 久久精品视频网站| 国内精品伊人久久久久777| 色综合久久88色综合天天 | 国产精品久久久久免费a∨| 久久精品黄AA片一区二区三区| 青青草国产精品久久| 久久国产香蕉一区精品| 人妻一本久道久久综合久久鬼色| 久久久午夜精品福利内容| 91久久精品国产91久久性色也| 久久久精品2019中文字幕之3| 综合久久国产九一剧情麻豆| 久久不见久久见免费影院www日本| 国产成人久久综合二区| 色噜噜久久综合伊人一本| 99久久综合国产精品免费| 久久久久久久久久久久中文字幕| 久久一区二区三区精品| 日本一区精品久久久久影院| 精品一区二区久久久久久久网站| 久久亚洲高清综合|