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      細胞培養的注意事項

      發布時間: 2022-02-28  點擊次數: 1586次
      01

      冷凍管應如何解凍? 


      取出冷凍管后,須立即放入37 C水槽中快速解凍,輕搖冷凍管使其在1分鐘內全部融化,并注意水面不可超過冷凍管蓋沿,否則易發生污染情形。另冷凍管由液氮桶中取出解凍時,必須注意安全,預防冷凍管之爆裂。





      02

      細胞冷凍管解凍培養時,是否應馬上去除DMSO?

      除少數特別注明對DMSO敏感之細胞外,絕大部分貼壁細胞株,在解凍之后,應直接放入含有12-16ml新鮮培養基之培養角瓶中,待隔天再置換新鮮培養基以去除DMSO即可,懸浮細胞可先離心去掉DMSO,如此可避免大部分解凍后細胞無法生長或貼附之問題。





      03

      可否使用不一樣的培養基培養同一個細胞呢?

      不能。每一個細胞株均有其特定使用且已適應之細胞培養基,若驟然使用和原先提供之培養條件不同之培養基,細胞大都無法立即適應,造成細胞無法存活或者老化空泡現象,如一定要替換,建議馴化,按照血清的馴化方式操作即可。







      04

      可否使用不同品牌的血清進行細胞培養呢?

      需要按比例馴化,新舊血清比為:3:2,1:2,1:3直到*更替。血清是細胞培養上一個極為重要的營養來源,所以血清的種類和品質對于細胞的生長會產生極大的影響。來自不同物種的血清,在一些物質或分子的量或內容物上都有所不同,血清使用錯誤常會造成細胞無法存活。









      05

      培養細胞時應使用5 %或10% CO2?或根本沒有影響?

      一般培養基中大都使用HCO3-/CO32-/H+作為pH的緩沖系統,而培養基中NaHCO3的含量將決定細胞培養時應使用的CO2濃度。當培養基中NaHCO3含量為每公升3.7 g時,細胞培養時應使用10% CO2;當培養基中NaHCO3為每公升1.5 g時,則應使用5% CO2培養細胞。





      06

      何時需更換培養基?

      視細胞生長密度而定,整體50%以下2-3天更換一次培養基,整體密度50%以上一天更換一次或遵照細胞株基本數據上之更換時間,按時更換培養基即可。



                                                               


      07

      附著性細胞繼代時所使用之trypsin-EDTA濃度?應如何處理?

      一般使用之trypsin-EDTA濃度為0.05% trypsin-0.53m MEDTA.4 Na。第一次開瓶后應立即少量分裝于無菌試管中,保存于–20 C,避免反復冷凍解凍造成trypsin之活性降低,并可減少污染之機會。





      08

      懸浮性細胞應如何傳代處理?

      一般僅需持續加入新鮮培養基于原培養角瓶中,稀釋細胞濃度即可,若培養液太多時,可將培養角瓶口端稍微抬高,直到無法容納為止。分瓶時取出一部分含細胞之培養液至另一新的培養角瓶,加入新鮮培養基稀釋至適當濃度,重復前述步驟即可。





      09

      貼壁細胞如何傳代處理? 

      依照細胞株基本數據和細胞的生長情況傳代,若第一次接種不了解細胞的基本特征,建議1:2傳代,后續觀察細胞特點,若1-2天即可達到密度80%以上建議1:3或以上。傳代的時候請注意:細胞數太少或稀釋得太多亦是造成細胞無法生長之一重要原因。





      10

      欲將一般動物細胞離心下來,其離心速率應為多少轉速?

      欲回收動物細胞,其離心速率一般為300xg (約1,000rpm),5 - 10分鐘,過高之轉速,將造成細胞死亡。



      細胞培養注意以上操作,有事半功倍的效果哦



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