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含甲酰胺的測序膠

發(fā)布時間： 2021-12-15　　點擊次數： 1550次

原理
聚丙烯酰胺凝膠加人甲酰胺可以使造成條帶壓縮的測序產物的二級結構不穩(wěn)定。
材料與儀器
DNA
甲酰胺甲醇乙醇 TEMED SDS
電泳儀
步驟
1. 按基本方案步驟1~5組裝凝膠平板夾層。

2. 按所需濃度配制甲酰胺凝膠溶液，加熱輕輕挽拌使之溶解，冷卻至30℃以下。

3. 加入0.15 ml TEMED及1 ml 10%過硫酸銨，馬上灌膠于凝膠平板夾層，觀察聚合情況。

4. 在45~70 W 恒功率下電泳。

5. 按基本方案步驟19~33進行干膠及處理，但步驟18在5%乙酸 / 20%甲醇固定液中固定凝膠15 min。

同實驗其他方法
變性凝膠電泳實驗
1. 制作每塊凝膠時，首先要用肥皂及水小心嚴格地清洗兩塊30 cm×40 cm的前后玻璃平板，用去離子水沖洗后晾干，用噴射洗瓶噴10%乙酵或異丙醇使平板濕海。 2. 然后用Kimwi
電解質梯度測序膠
1. 按基本方案步驟1~22灌制凝膠及進行預電泳，但上槽緩沖液為0.5×TBE，下槽為1×TBE。 2. 按基本方案步驟23~26步準備樣品及加樣。 3.
緩沖液梯度測序膠
1. 按基本方案步驟1~5組裝凝膠平板夾層。 2. 在2個100 ml 燒杯中，配制緩沖液梯度凝膠溶液：50 ml 用0.5×TBE配制，25 ml 用2.5×TBE配制
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