細(xì)胞培養(yǎng)對(duì)無(wú)菌環(huán)境的要求較為嚴(yán)格。稍有不慎細(xì)胞全軍覆沒(méi)，損失慘重。為此保持細(xì)胞室的無(wú)菌環(huán)境尤為重要。細(xì)胞培養(yǎng)間的殺菌主要涉及空氣的殺菌和操作臺(tái)，培養(yǎng)箱的滅菌，其常見(jiàn)的方法如下。

1、 每天使用細(xì)胞房前需提前將層流室及緩沖間紫外燈打開(kāi)照射30min。
2、 紫外滅菌消毒結(jié)束后通風(fēng)15min，實(shí)驗(yàn)人員方可進(jìn)入細(xì)胞房工作。
3、 進(jìn)入細(xì)胞房前先換專用鞋。
4、 進(jìn)入緩沖間穿換上專用實(shí)驗(yàn)服。
5、 進(jìn)入層流室須戴上手套、口罩，消毒后才可以進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。
6、 每間層流室內(nèi)最多可4個(gè)人使用，除實(shí)驗(yàn)外，避免長(zhǎng)時(shí)間逗留。
7、 實(shí)驗(yàn)操作時(shí)盡量避免交談，走動(dòng)。
8、 始終保持細(xì)胞房?jī)?nèi)外地面、桌面的清潔，物品擺放整齊。
9、 每天工作結(jié)束后，需關(guān)掉細(xì)胞房?jī)?nèi)不用的儀器、細(xì)胞房的燈、空調(diào)，離開(kāi)時(shí)鎖好細(xì)胞房的門。
10、細(xì)胞房?jī)?nèi)的實(shí)驗(yàn)服、鞋帽禁止穿出實(shí)驗(yàn)室。
11、細(xì)胞房?jī)?nèi)垃圾及時(shí)清理，每周對(duì)細(xì)胞房進(jìn)行消毒清潔。

1、從培養(yǎng)箱取放物品前，用酒精清潔雙手（或手套），盡量縮短開(kāi)門時(shí)間和減少開(kāi)門次數(shù)。
2、培養(yǎng)瓶皿放入培養(yǎng)箱前，可以用酒精消毒表面，并稍等至酒精揮發(fā)后再放入，以免培養(yǎng)箱內(nèi)滯留過(guò)多乙醇蒸氣。
3、按預(yù)定位置擺放培養(yǎng)器皿，方便查找，以免長(zhǎng)時(shí)間敞開(kāi)培養(yǎng)箱。
4、普通培養(yǎng)中的細(xì)胞，若非實(shí)驗(yàn)需要，每瓶/板細(xì)胞每天只需要觀察生長(zhǎng)狀態(tài)一次。
5、每次從培養(yǎng)箱拿取物品時(shí)，注意培養(yǎng)箱的CO2補(bǔ)給情況，及CO2鋼瓶中氣體使用情況。

1、超凈臺(tái)使用前用紫外燈照射15分鐘滅菌，使用前、后需用酒精棉球擦拭工作區(qū)消毒，所有物品放入超凈臺(tái)內(nèi)使用前均應(yīng)消毒。
2、如需點(diǎn)燃酒精燈，需檢查瓶中酒精是否足夠，液面應(yīng)占瓶高1/3-2/3。
3、超凈臺(tái)中應(yīng)擺放廢液杯和廢品杯各一只，用于暫時(shí)存放廢棄物，實(shí)驗(yàn)結(jié)束后將杯內(nèi)垃圾倒入水池或垃圾桶中，并沖洗晾干備用。

1、顯微鏡使用前，用酒精棉從中間至周圍擦拭載物臺(tái)。
2、離開(kāi)細(xì)胞房時(shí)或較長(zhǎng)時(shí)間不需使用時(shí)，及時(shí)關(guān)上電源，延長(zhǎng)燈泡壽命。盡量避免頻繁開(kāi)關(guān)顯微鏡電源。

1、 細(xì)胞房常用消毒劑
1）清潔用水：純凈水
2）消毒劑：

75%乙醇          

0.2% 84消毒液：5L純凈水+10mL84消毒液     

0.2% 新潔爾滅：5L純凈水+10mL新潔爾滅

2、細(xì)胞房清潔頻次
1）每周五進(jìn)行一次清潔、消毒；消毒液要交換使用，每種消毒液使用一個(gè)月要更換另一種，防止微生物的耐藥性。
2）如有大物體搬進(jìn)潔凈區(qū)，需要對(duì)物體以及物體接觸過(guò)的地方進(jìn)行及時(shí)清潔、消毒

3、清潔、消毒程序

1）提前配制2組消毒液，幾塊50cm長(zhǎng)的一次性醫(yī)用紗布
2）將待清潔區(qū)域內(nèi)廢棄物清理倒掉
3）用一組消毒液+純凈水對(duì)門窗、玻璃、墻面、天花板、照明燈（兩次清潔）
4）用另一組消毒液+純凈水依次對(duì)細(xì)胞室設(shè)備、桌面、地面（兩次清潔）
5）清潔用具及時(shí)進(jìn)行清潔，并存放到相應(yīng)位置，不得隨意亂放
6）紫外照射過(guò)夜

4、注意事項(xiàng)
1）清潔時(shí)不能干掃或干擦，以免起塵，造成污染
2）燈具清潔后要停數(shù)分鐘后啟用電源開(kāi)關(guān)
3）清潔標(biāo)準(zhǔn)為目檢潔凈，無(wú)廢物，無(wú)印記，無(wú)污漬。

如有污染細(xì)胞間整體滅菌方法

1、甲醛熏蒸
甲醛是一種高效能化學(xué)滅菌劑。不易燃、不爆炸、不腐蝕金屬。它能與蛋白質(zhì)中的氨基酸結(jié)合而使蛋白變性，使酶的活性消失。故有強(qiáng)大的殺菌作用。一般稱作為“大消"，用來(lái)對(duì)細(xì)胞間進(jìn)行*的消毒殺菌。但是甲醛是一種對(duì)人體有害的物質(zhì)，并且細(xì)胞培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)室一般空氣流通都很差，甲醛的排出也很慢，至少要一周以上。如果要緊急使用的話，在甲醛滅菌完后，可以用等量的氨水中和空氣中的甲醛。

2、空氣過(guò)濾（恒溫恒濕裝置）
這是一種較為安全，殺毒效果也最是好的方法，只是費(fèi)用較為昂貴。

3、紫外線燈殺菌
紫外線滅菌是用紫外線管照射進(jìn)行的。波長(zhǎng)在220-300nm的紫外線稱為“殺生命區(qū)"，其中以260nm的殺菌力*。紫外線作用于細(xì)胞DNA，使DNA鏈上相鄰的嘧啶堿形成嘧啶二聚體（如胸腺嘧啶二聚體），抑制了DNA復(fù)制。另外，空氣在紫外線照射下可以產(chǎn)生臭氧，臭氧也有一定的殺菌作用。紫外線透過(guò)物質(zhì)的能力很差，適用于空氣及物體表面的滅菌，與被照物的距離以不超過(guò)1.2m為宜，照射時(shí)間以紫外線燈管的功率大小、被照空間及面積大小，根據(jù)滅菌效果測(cè)定結(jié)果而定。由于上述各種情況的不確定性，導(dǎo)致紫外線殺菌效果不是很理想，一般需要過(guò)夜殺菌。此外紫外線對(duì)人體有傷害作用，不要在紫外線燈照射下進(jìn)行操作。

4、電子消毒滅菌器殺菌
即臭氧滅菌。在高壓電場(chǎng)作用下，電子管的內(nèi)外電極發(fā)生強(qiáng)烈電子轟擊，使空氣電離而將空氣中的氧轉(zhuǎn)換成臭氧。臭氧在常溫、常壓下分子結(jié)構(gòu)不穩(wěn)定，很快自行分解成氧氣（O2）和單個(gè)氧原子（O）；后者具有很強(qiáng)的活性，能同細(xì)菌的胞膜及酶蛋白氫硫基進(jìn)行氧化分解反應(yīng)，從而靠氧原子的彌漫性擴(kuò)散達(dá)到殺菌之目的，消毒時(shí)沒(méi)有死角。消毒后空間的殘留的多余氧原子只需30～40min則會(huì)自行重新結(jié)合成為普通氧原子（O2），不存在任何有毒殘留物，故稱無(wú)污染消毒劑，它不但對(duì)各種細(xì)菌（包括肝炎病毒，大腸桿菌，綠濃桿菌及雜菌等）有*的殺滅能力，而且對(duì)殺死霉素也很有效。