伊人久久亚洲综合影院首页_久久97久久97精品免视看秋霞_久久精品亚洲中文字幕无码麻豆_久久久999久久久精品

銷售熱線

19126518388
  • 技術(shù)文章ARTICLE

    您當前的位置:首頁 > 技術(shù)文章 > 大鼠星型膠質(zhì)細胞培養(yǎng)實驗——酶消化法

    大鼠星型膠質(zhì)細胞培養(yǎng)實驗——酶消化法

    發(fā)布時間: 2021-12-05  點擊次數(shù): 1849次

    材料與儀器

    Wistar大鼠乳鼠
    FBS DMEM 胰蛋白酶 EDTA 酒精
    眼科剪 滴管 離心機 培養(yǎng)皿 CO2培養(yǎng)箱

    步驟

    一、實驗步驟

    1. 新生1-2 天Wistar大鼠乳鼠,經(jīng)75%酒精消毒,斷頭處死。
     
    2. 取腦放入冷的D-Hanks'平衡鹽溶液,去除腦膜及大血管。
     
    3. 分離兩側(cè)大腦皮質(zhì)并剪成1mm3 大小,加入0.25%胰蛋白酶37℃空氣浴震蕩消化10 min。
     
    4. 用含10% FBS的DMEM培養(yǎng)基終止消化,離心(1 000 rpm,10 min),去上清。
     
    5. 用含10% FBS的DMEM培養(yǎng)基重懸沉淀,經(jīng)75μm篩網(wǎng)過濾,收集濾液,再次離心10 min,收集沉淀用含10% FBS的DMEM培養(yǎng)基重懸,調(diào)整細胞密度至1.5x106/ml,種植于75 cm2 培養(yǎng)瓶。
     
    6. 經(jīng)1 小時差速黏附去除成纖維細胞后,將細胞懸液轉(zhuǎn)移到一新的75 cm2 培養(yǎng)瓶繼續(xù)培養(yǎng),兩天換液一次。
     
    7. 7 天后將培養(yǎng)瓶放入水平搖床(260 rpm,2 h,37℃),換液棄除小膠質(zhì)細胞,放入培養(yǎng)箱平衡1 小時,重新置于水平搖床18 h。
     
    8. 換液棄除少突膠質(zhì)細胞,用新鮮培養(yǎng)基洗2 遍,加入0.25%胰蛋白酶與0.02% EDTA 1:1 混合液消化、傳代備用。
     
    二、 形態(tài)學觀察

    倒置相差顯微鏡下觀察細胞形態(tài)和生長狀況。
     
    三、 細胞生長曲線繪制

    傳代后的細胞以 2x104/ml 的密度種植于24 孔培養(yǎng)板中培養(yǎng),3 天換液1 次, 每24 小時取3 孔計數(shù),連續(xù)7 天,取均值繪制生長曲線。
     
    四、星型膠質(zhì)細胞的鑒定

    膠質(zhì)纖維酸性蛋白(GFAP)免疫細胞組織化學鑒定方法。取星型膠質(zhì)細胞去除培養(yǎng)基,用PBS洗3 遍,4%多聚甲醛室溫固定1 小時,PBS洗3 次,每次5 分鐘,0.3% H2O2 30 分鐘以去除內(nèi)源性過氧化物,PBS洗3 次每次5 分鐘,加含0.5% Triton X-100 的山羊血清封閉30 分鐘,滴加兔抗GFAP 抗體(1:75),4℃ 18 小時,PBS洗3 次每次5 分鐘,滴加生物素標記羊抗兔IgG,室溫20 分鐘,PBS洗3 次,每次5 分鐘,滴加辣根酶標記鏈霉卵白素工作液,室溫20 分鐘,PBS洗3 次,每次5 分鐘,DAB顯色。
     五、結(jié)果

    1. 形態(tài)學觀察:光鏡下,傳代的星型膠質(zhì)細胞折光性強,形狀不規(guī)則,主要為多角形,胞體大而扁平、胞質(zhì)豐富,細胞核圓形或卵圓形,偏于胞體一側(cè),內(nèi)有1-2 個核仁,有多個粗短枝狀初級胞突,部分細胞突起變細變長,6-7 天后細胞融合成單層,符合神經(jīng)膠質(zhì)細胞生長特性,如下圖。
     

    星型膠質(zhì)細胞單層生長(x100)

    圖1:星型膠質(zhì)細胞形成融合狀,單層生長(x200)
     
    2.  鑒定:細胞經(jīng)膠質(zhì)纖維酸性蛋白(GFAP)染色98%以上均為細胞漿著色,而胞核未見著色,見下圖,證明采用上述方法獲得的細胞為星型膠質(zhì)細胞,純度高, 可用于實驗。

    圖2:免疫組化鑒定,GFAP 染色

    3. 細胞生長曲線繪制如下:

    圖3:細胞生長曲線


產(chǎn)品中心 Products
伊人久久亚洲综合影院首页_久久97久久97精品免视看秋霞_久久精品亚洲中文字幕无码麻豆_久久久999久久久精品

    亚洲另类在线一区| 亚洲精品水蜜桃| 中文子幕无线码一区tr| 一个色妞综合视频在线观看| 国产自产视频一区二区三区| 在线免费观看日韩欧美| 国产欧美在线观看一区| 日本不卡高清视频| 色诱亚洲精品久久久久久| 久久久久97国产精华液好用吗| 午夜av电影一区| 97精品电影院| 欧美国产综合色视频| 经典三级在线一区| 欧美一区二区久久| 亚洲成人777| 91搞黄在线观看| 专区另类欧美日韩| 成人综合在线视频| 久久噜噜亚洲综合| 免费日韩伦理电影| 在线播放91灌醉迷j高跟美女| 亚洲黄色性网站| 成人高清免费观看| 欧美国产欧美综合| 国产成人免费视频精品含羞草妖精| 精品捆绑美女sm三区| 免费欧美高清视频| 欧美一级免费大片| 青青草97国产精品免费观看无弹窗版| 精品视频免费看| 亚洲一线二线三线视频| 色综合天天在线| 综合自拍亚洲综合图不卡区| 成人激情免费网站| 国产女人aaa级久久久级 | 日韩av不卡一区二区| 欧美日韩视频第一区| 夜夜操天天操亚洲| 欧美亚洲动漫另类| 亚洲大片一区二区三区| 精品视频在线免费| 天堂一区二区在线免费观看| 欧美裸体bbwbbwbbw| 亚洲va韩国va欧美va| 欧美日韩免费高清一区色橹橹| 亚洲激情中文1区| 欧美在线免费观看亚洲| 亚洲1区2区3区4区| 91精选在线观看| 久久疯狂做爰流白浆xx| 久久网这里都是精品| 国产精品18久久久久久vr| 国产日韩欧美激情| 99麻豆久久久国产精品免费| 夜夜精品视频一区二区| 欧美日韩精品一区视频| 日韩av午夜在线观看| 精品国免费一区二区三区| 国产寡妇亲子伦一区二区| 欧美国产日本视频| 色国产综合视频| 日本中文字幕一区| 欧美精品一区二区三区在线播放| 国产激情一区二区三区桃花岛亚洲| 国产精品日产欧美久久久久| 色综合视频在线观看| 婷婷久久综合九色综合伊人色| 日韩欧美一区在线观看| 韩国视频一区二区| 中文字幕日韩精品一区| 欧美日韩综合不卡| 激情综合色播激情啊| 国产精品欧美一级免费| 欧美亚洲动漫精品| 激情欧美日韩一区二区| 日韩一区在线看| 欧美日韩久久一区| 国产一区二区在线视频| 国产精品久久久久久久岛一牛影视| 91成人国产精品| 美女一区二区视频| 国产精品毛片无遮挡高清| 欧美在线视频你懂得| 久久福利视频一区二区| 国产精品高潮呻吟| 欧美精品乱码久久久久久按摩| 国产在线看一区| 亚洲精品一二三四区| 欧美一区二区福利在线| 国产不卡高清在线观看视频| 亚洲一区二区三区免费视频| 精品人在线二区三区| 91一区二区在线观看| 美女免费视频一区二区| 亚洲三级理论片| 日韩欧美123| 色综合久久88色综合天天免费| 青青草国产成人av片免费| 国产精品色眯眯| 在线播放视频一区| 成人黄色777网| 日韩成人午夜电影| 亚洲天堂免费在线观看视频| 欧美va天堂va视频va在线| 日本福利一区二区| 国产麻豆午夜三级精品| 亚洲sss视频在线视频| 国产精品天天看| 欧美一区二区三区影视| av成人动漫在线观看| 久久国产欧美日韩精品| 一区二区三区视频在线观看| 久久久精品天堂| 555夜色666亚洲国产免| 色香色香欲天天天影视综合网| 国产毛片精品国产一区二区三区| 午夜婷婷国产麻豆精品| 自拍av一区二区三区| 久久久精品免费网站| 91精品婷婷国产综合久久性色| 色综合久久天天| 国产99一区视频免费| 美国三级日本三级久久99| 亚洲小说欧美激情另类| 中文字幕亚洲视频| 久久久久99精品一区| 日韩欧美在线观看一区二区三区| 欧美性感一区二区三区| 99re免费视频精品全部| 国产美女久久久久| 日本特黄久久久高潮| 亚洲国产美女搞黄色| 亚洲人成在线观看一区二区| 国产亚洲精品福利| 精品三级在线观看| 91精品国产综合久久精品app| 91久久香蕉国产日韩欧美9色| 国产91精品露脸国语对白| 激情五月婷婷综合| 麻豆精品视频在线观看| 日韩激情一区二区| 亚洲图片自拍偷拍| 一区二区三区中文字幕电影| 国产精品成人网| 国产精品视频看| 亚洲国产精品av| 欧美激情在线一区二区| 久久久天堂av| 久久综合久久鬼色中文字| 欧美大片免费久久精品三p| 91精品国模一区二区三区| 欧美日韩免费观看一区三区| 欧美性猛交一区二区三区精品| 91啪在线观看| 色婷婷亚洲婷婷| 99热99精品| 91丨porny丨在线| 91浏览器在线视频| 91小宝寻花一区二区三区| proumb性欧美在线观看| 波多野结衣精品在线| 成人av综合一区| av一区二区三区黑人| 91色综合久久久久婷婷| 色婷婷av一区二区三区gif | 久久精品免视看| 国产亚洲欧洲一区高清在线观看| 欧美精品一区二| 久久综合九色综合97婷婷| 久久久久久久免费视频了| 久久精品视频网| 中国色在线观看另类| 国产精品久久久久久久久免费丝袜 | 中文字幕一区视频| 国产精品国产精品国产专区不片| 中文字幕国产精品一区二区| 国产精品久久久久久久裸模| 亚洲日本青草视频在线怡红院 | 日本精品视频一区二区三区| 在线亚洲一区二区| 精品视频一区二区不卡| 9191成人精品久久| 精品日韩在线观看| 欧美激情在线一区二区| 中文字幕一区二区三区四区 | 国产尤物一区二区| 国产风韵犹存在线视精品| www.欧美精品一二区| 欧洲一区二区av| 91精品国产91热久久久做人人| 日韩精品一区二区三区视频| 久久久亚洲精品一区二区三区| 国产精品污网站| 亚洲综合色丁香婷婷六月图片| 日韩电影一区二区三区| 国产乱人伦偷精品视频免下载| 91在线云播放| 制服丝袜国产精品| 国产欧美一区在线|