難轉染細胞Thp-1高效率轉染條件分享

Thp-1細胞高效率轉染條件分享

一、轉染材料準備

1. 轉染試劑用量：10ul

2. siRNA濃度：20um/L

3. 細胞密度：1*106-1*105

4. 轉染用培養板：6孔板

5. 轉染試劑：Advanced DNA RNA轉染試劑；貨號：AD600150

6. 轉染時間：48小時

7. 細胞培養胎牛血清：Z7180FBS-500超低內毒素胎牛血清

8. 細胞凍存液：L0100無血清細胞凍存液.

注意：本細胞轉染用量條件不適合lipo使用。

二、操作過程：

1.提前1天接種細胞：細胞匯合度在60-80%左右，再進行轉染。

2. 核酸復合物制備：將核酸與轉染試劑按照比例關系直接混合，用移液器吹打、混勻，室溫靜止15分鐘。

3.在細胞培養基中加入核酸復合物：根據參考用量在細胞中加入核酸復合物，并輕輕混勻；細胞培養基里面可以含有血清。

4.細胞換液：轉染24小時后對細胞進行正常換液，懸浮細胞轉染過程中不用換液。

5.分析結果：質粒DNA轉染48-72小時后熒光檢測轉染效率，48-96小時檢測mRNA或蛋白表達。若進行穩定表達細胞株的篩選，則在轉染后24-48小時左右加入適量的藥物進行篩選。siRNA轉染后9小時熒光檢測轉染效率，48-72小時檢測mRNA或蛋白表達。