細胞不長，這些方面您注意了嗎？

答：由于大多數細胞適宜pH為7.2-7.4，偏離此范圍可能對細胞生長將產生有害的影響，目前也有些無血清培養基或者轉染用的培養基PH值會在6.5左右。因為各種細胞對pH的要求也不*相同，原代培養細胞一般對pH變動耐受差，無限細胞系耐受力強。但總體來說，細胞耐酸性比耐堿性強一些。在配制培養用液時，需要注意一點：培新配的培養基在經過0.10um或0.22um濾膜過濾時，溶液的pH還會向上浮動0.2左右

答：通常細胞生長得非常快時，pH值通常下降得很快。此時可以及時傳代、提高傳代比例或降低血清量等方法進行解決。此外，培養瓶蓋擰得太緊、NaHCO3緩沖系統緩沖能力不夠、培養液中鹽濃度不正確、細菌、酵母或真菌污染等也能導致pH值通常下降得很快。

    （1）按培養液中NaHCO3濃度增加或減少培養箱內CO2濃度，2.0g/L到3.7g/L濃度NaHCO3對應CO2濃度為5％到10％。

    （2）改用不依賴CO2培養液。

    （3）松開瓶蓋1/4圈。加HEPES緩沖液至10到25mM終濃度。

    （4）在CO2培養環境中改用基于Earle′s鹽配制的培養液，在大氣培養環境中培養改用Hanks鹽配制的培養液。

    （5）如果是污染造成的則丟棄培養物或用抗生素除菌。

答：丙酮酸鈉可以作為細胞培養中的替代碳源，盡管細胞更傾向于以葡萄糖作為碳源，但是，如果沒有葡萄糖的話，細胞也可以代謝丙酮酸鈉。

答：HBS和EBS的主要差別在于碳酸氫鈉的水平,在Eagle′s(2.2g/L)中比在Hanks′(0.35g/L) 中高。碳酸氫鈉需用高水平的CO2平衡，以維持溶液的PH值。Eagle′s液在空氣水平的CO2中，溶液會變堿，Hanks′液在CO2培養箱中會變酸。如果希望在CO2培養箱中保存組織，需要用Eagle′s液，。如果僅僅是清洗將要在細胞培養基中儲存的組織，用Hanks′液就可以了。

答：一般培養基中大都使用HCO3-/CO32-/H+作為pH的緩沖系統，而培養基中NaHCO3的含量將決定細胞培養時應使用的CO2濃度。當培養基中NaHCO3含量為每公升3.7g時，細胞培養時應使用10%CO2；當培養基中NaHCO3為每公升1.5g時，則應使用5%CO2培養細胞。

答：可能的原因有培養箱內無CO2；培養箱內溫度波動太大；細胞凍存或復蘇過程中損傷；培養液滲透壓不正確；培養液中有毒代謝產物堆積等。

     解決辦法可以檢測培養箱內CO2濃度，檢查培養箱內溫度；取新的保存細胞種；檢測培養液滲透壓，換入新鮮培養液等。