qPCR實驗為什么要制作熔解曲線？

熒光DNA結合染料法的缺點是它們能在反應中結合所有DNA雙鏈，包括在實時熒光PCR中產生的引物二聚體，和其他非特異性產物，引起大量的背景噪聲信號。

這種噪聲會影響我們對靶基因產量的評估，甚至熒光強度和靶基因的起始量、全長根本沒什么關系。

因此，我們使用熒光DNA染料結合法時，需要對擴增產物進行熔解曲線的分析。通過對擴增反應產物逐漸升溫，同時監測每一步的熒光信號來制作熔解曲線。

熔解曲線的縱坐標是熒光信號值，橫坐標是溫度值。通過觀察產生的信號峰和對應溫度，可以判斷產物狀態。

理想情況下，熔解曲線應該是單峰，峰值對應溫度是特異性產物的退火溫度，這才能說明擴增產物中特異性產物占比大。熒光DNA結合染料法的缺點是它們能在反應中結合所有DNA雙鏈，包括在實時熒光PCR中產生的引物二聚體，和其他非特異性產物，引起大量的背景噪聲信號。

這種噪聲會影響我們對靶基因產量的評估，甚至熒光強度和靶基因的起始量、全長根本沒什么關系。

因此，我們使用熒光DNA染料結合法時，需要對擴增產物進行熔解曲線的分析。通過對擴增反應產物逐漸升溫，同時監測每一步的熒光信號來制作熔解曲線。

熔解曲線的縱坐標是熒光信號值，橫坐標是溫度值。通過觀察產生的信號峰和對應溫度，可以判斷產物狀態。

理想情況下，熔解曲線應該是單峰，峰值對應溫度是特異性產物的退火溫度，這才能說明擴增產物中特異性產物占比大。