細胞培養無小事——貼壁細胞的消化方法

如何消化讓細胞生長的更好，養細胞關鍵還是在消化，以下介紹幾種細胞的消化方法

一、酶消化法

1、胰酶，這是用得最多的。一般濃度在0.25-0.5%。消化的時間根據細胞種類、操作手法，溫度等因素而變化，從幾分鐘到幾十分鐘不等。0.25%的胰酶，37℃一般在消化單層貼壁的細胞一般1-5分鐘就足夠了，用血清或者含血清的*培養基終止。

2、膠原酶，一般用于原代細胞消化，這種方法作用溫和，對細胞損傷較小，消化的時間也略長，不推薦的原因是膠原酶有點小貴而且培養細胞株感覺沒有多大的必要。

二、離子螯合劑

不破壞細胞表面分子，僅與CAMs螯合，因此，如果檢測細胞表面分子的話，盡量，甚至是一定不要用酶消化法。

1、EDTA，一般濃度在0.02%左右，使用它來消化細胞時，注意它能顯著影響pH值，而且在弱堿性條件下才易溶，而且它不能被終和，因此，消化下來的細胞一定要洗一遍。

三、物理法

直接吹打或用細胞刮刀，貼壁很牢的細胞可以使用這個方法，吹打和刮刀都會給細胞造成嚴重的損傷，建議不到萬不得已不要使用此法。

四、冷凍法

采用細胞冷凍后收縮的原理，從而使細胞從培養瓶上脫落。優點：對細胞損傷小，不需要中止或洗細胞，方便，不需要另外配制消化液。特別適用那些貼壁不是特別緊，又特別嬌氣的細胞。缺點：細胞常成小片脫落，重新鋪板后細胞生長會有點聚團。常用于間充質干細胞、DC細胞的消化，具體過程是：1、用較多的4℃的PBS洗滌一遍細胞，再加入適量的 4℃的PBS，靜置操作臺上，很快細胞受冷皺縮小片脫落，3、輕輕吹打，細胞即*脫落，4、按一定比例傳代。

細胞消化難題：

1，成團、絮狀：

消化液里加入edta可以減少細胞成團的現象，血清可以終止胰酶的作用，越好的血清使用的效價更高，用胰酶消化后加血清終止，如果消化液中加入了edta的話，就要將消化液倒干凈，如果細胞貼壁要求不是很嚴格的話，一般不需要進行離心。

比如說4T1細胞，這種細胞的貼壁能力天生很強，用0.5%胰酶(含0.1%EDTA)一般要消化10~12min。用PBS洗滌時要洗凈殘余的培養基，加入胰酶后在培養箱中消化(避免細胞室溫下受損以及在此溫度時胰酶活性*)至細胞收縮變圓(可顯微鏡下觀察)且有少許細胞脫落(呈流沙狀)，隨后立即棄去胰酶(如果脫落的細胞很多且需要大量細胞實驗，則不能棄去胰酶)，加入培養基輕輕彈散(不能用無血清培養基或者PBS替代，否則細胞聚集成團塊或絮狀)。

也可以用2%利多卡因消化5-8分鐘，然后再棄去。

消化過度怎么辦？

馬上用培養基中和，收集全部的細胞到無菌的離心管中800RPM 3分鐘。棄上清，用全培重懸，換新的培養瓶繼續培養，狀態不好的細胞在培養的過程中會死亡脫落，在換液的時候可以清除掉。