內(nèi)皮細胞的培養(yǎng)方法及內(nèi)皮微粒的表達

內(nèi)皮細胞是每個組織中不可少的傳導(dǎo)工具，包括萬惡的腫瘤，也是在初發(fā)階段，血管先擴增一波，從而大面積進攻組織，內(nèi)皮細胞怎么提取培養(yǎng)呢？

原代內(nèi)皮細胞分離一般采用的是組織酶消化法，不要天真的以為您只要酶消化下來的細胞都是內(nèi)皮細胞了 ，有可能也有成纖維細胞哦 ，這就牽扯到怎么抑制成纖維細胞的生長，讓內(nèi)皮細胞趕快成長起來的方法了。

內(nèi)皮細胞一般采用內(nèi)皮細胞*培養(yǎng)基來維持細胞生長，需要注意的是才分離出來的細胞一般都不會采用無血清的培養(yǎng)基培養(yǎng)，因為無血清的培養(yǎng)基可能會導(dǎo)致細胞會有不貼壁的現(xiàn)象發(fā)生，需要更換無血清培養(yǎng)方式需等細胞穩(wěn)定后才可開始更換無血清組分，按比列循序漸進更適合細胞的生長，這也是有些老師在提取原代的時候使用細胞包被液包被培養(yǎng)瓶的原因。 

  內(nèi)皮細胞培養(yǎng)的時候?qū)ε囵B(yǎng)基的要求很高，即使是細胞株HMEC-1也必須要使用MCDB這種不是很常規(guī)的基礎(chǔ)培養(yǎng)基 ，然后加血清，加EGF,加胰島素才能好好生長，所以細胞培養(yǎng)方式不對 ，努力就會白費，不要用很激進的方法去改變?nèi)魏渭毎呐囵B(yǎng)方式 ，因為這樣會讓細胞的部分基因丟失從而導(dǎo)致細胞變異；內(nèi)皮細胞培養(yǎng)需要勤換液，因為他們的分泌比較多，特別在代次不好的時候會很明顯。

   原代內(nèi)皮細胞一個特別顯著的特征就是在細胞代次比較好的時候它們消化需要的時間特別短，彷佛這邊才加上胰酶那邊就馬上需要終止了 ，對胰酶比較敏感，而傳代次數(shù)太多的細胞或者內(nèi)皮細胞株就表現(xiàn)不一樣了 ，加上胰酶之后它就像個沒有睡醒的孩子一樣 “吹吹打打"才能下來。

內(nèi)皮微粒具有轉(zhuǎn)運蛋白、RNA等信號分子的功能，在調(diào)節(jié)血栓形成、動脈粥樣硬化發(fā)生、炎癥反應(yīng)、血管功能中發(fā)揮著重要作用。

  內(nèi)皮微粒表達很多內(nèi)皮特異性的分子，如CD31、CD146、CD62E、CD51 CDl44， 凋亡誘導(dǎo)下的內(nèi)皮微粒CD31、CDl05表達增加，促活化因子誘導(dǎo)下CD54、CD62E表達增加；促血栓形成狀態(tài)下，內(nèi)皮微粒表面的促凝血因子active tissue factor （TF） 、platelet factor 3表達增加。由于內(nèi)皮微粒表面攜帶有大量內(nèi)皮細胞的表面蛋白和生物信息，在不同的病理和生理情況下表達情況發(fā)生改變，是非侵襲性的監(jiān)測內(nèi)皮細胞功能的潛在標(biāo)志。

  內(nèi)皮細胞也是目前研究使用最多的原代細胞，這和它的功能密不可分，cell systems提供37種原代內(nèi)皮細胞，細胞不采用抗體分選細胞無抗性 ；單管細胞達100萬以上的細胞量，減少您實驗購買細胞的經(jīng)費。