常見細(xì)胞培養(yǎng)試劑的配制方法分享

培養(yǎng)用液是維護(hù)組織細(xì)胞生存、生長及進(jìn)行細(xì)胞培養(yǎng)各項操作過程中所需的基本溶液。常用的細(xì)胞培養(yǎng)試劑包括：超純水，平衡鹽溶液，消化液，PH調(diào)整液，谷氨酰胺溶液，抗生素溶液。

常見的超純水

1. 使用純水機(jī)純化而來；

2. 蒸餾水和離子交換水

3. 三蒸水

平衡鹽溶液

1、平衡鹽溶液主要由無機(jī)鹽、葡萄糖組成，它的作用是維持細(xì)胞滲透壓平衡，保持pH穩(wěn)定及提供簡單的營養(yǎng)。主要用于取材時組織塊的漂洗、細(xì)胞的漂洗、配制其他試劑等。

2、D-Hank’s與Hank’s的一個主要區(qū)別在于前者不含有Ca2+、Mg2+，因此D-Hank’s常用于配制胰酶溶液。

3、配制平衡鹽溶液也應(yīng)當(dāng)用三蒸水。如果配方中含有Ca2+、Mg2+，應(yīng)當(dāng)首先溶解這些成分。配好的平衡鹽溶液可以過濾除菌或高溫高壓滅菌.

幾種常見的平衡鹽溶液配方：

消化液

（1）以配制250ml0.25%DEDTA的胰酶為例，稱取胰蛋白酶粉末0.625g置燒杯中，先用少許D-Hanks 或PBS平衡鹽溶液（pH7.2 左右）調(diào)成糊狀，然后再補(bǔ)足D-Hanks 平衡鹽溶液，并不斷攪拌振蕩直到攪拌混勻，置室溫4 小時或冰箱過夜；

（2）次日，先用濾紙粗濾，再進(jìn)行過濾除菌，定容至250ml，分裝于鹽水瓶或三角瓶，低溫冰箱保存?zhèn)溆茫让赋Ｓ脻舛葹?.25% 或0.125%。

胰蛋白酶作用于與賴氨酸或精氨酸相連接的肽健，除去細(xì)胞間粘蛋白及糖蛋白，影響細(xì)胞骨架，從而使細(xì)胞分離。

胰蛋白酶液濃度越高，作用越強(qiáng)，但超過一定限度會損傷細(xì)胞。

胰蛋白酶是一種黃白色粉末，用無Ca2+、Mg2+的PBS緩沖液配制常用的胰蛋白酶液濃度是0.25％ 。用濾器過濾除菌。

胰蛋白酶液消化時間：2-10分鐘，用含血清培養(yǎng)液終止其對細(xì)胞的消化作用。

pH調(diào)整液

常用的有HEPES液和NaHC03溶液

 1.NaHC03溶液:NaHC03是培養(yǎng)基中必須添加的成分，一般情況下是按照說明書的要求準(zhǔn)確添加，以保證培養(yǎng)基在5%CO2的環(huán)境下pH達(dá)到設(shè)計標(biāo)準(zhǔn)。

 2．HEPES液：HEPES是一種弱酸，中文名稱是羥乙（乙）基哌（派）嗪乙硫磺酸。HEPES對細(xì)胞無毒性，主要作用是防止培養(yǎng)基pH迅速變動

100X的Hepes配制：取23.8g的HEPES溶于90ml的雙蒸水中 ，用1N的NAHCO3調(diào)PH至7.8-8.0之間，過濾除菌，定容至100ml.

谷氨酰胺補(bǔ)充液:

谷氨酰胺在細(xì)胞代謝過程中起重要作用，合成培養(yǎng)基中都要添加，由于谷氨酰胺容易降解，所以都是在使用前添加。谷氨酰胺使用終濃度為0.002mol/L。

一般配制為100倍濃縮液，配制時應(yīng)加溫至30℃，*溶解后過濾除菌，分裝至小瓶，儲存于-20℃。

抗生素溶液:

常用的是青鏈霉素，俗稱“雙抗溶液"。

青霉素主要對革蘭陽性菌有效，鏈霉素主要對革蘭陰性菌有效。加入這兩種抗生素可預(yù)防絕大多數(shù)細(xì)菌的污染。

青霉素使用的終濃度為100000U/L，鏈霉素使用的終濃度為0.1g/L。一般配制成100倍濃縮液，可用PBS或培養(yǎng)基配制。