WB電泳技巧分享

① 清洗玻璃板，去離子水沖，風干或烤干（一定要以處女座的精神去嚴格要求自己把板子洗干凈，相當重要） 

② 按說明書配膠。先配下膠（分離膠），一般兩塊板配 10ml 的 10%的膠（20~80kDa 通用）膠的濃度根據你所需要跑的蛋白的分子量大小決定,混勻后灌膠，立即用正丁醇或無水乙醇封，待凝固后倒出正丁醇，用去離子水沖洗，濾紙吸干；③ 配上膠（積層膠），參考說明書，一般兩塊板配 4ml 的 5%的膠，混勻后灌膠，插板,待凝固。（可 4°過夜） 

④ 配電泳液（tris3.03g，甘氨酸 14.4g，SDS1g，定容至 1L） 

⑤ 將玻璃板裝好放入電泳槽中，加電泳液，輕輕拔梳。 

⑥ 上樣（這是每個WB達人最能裝逼的一個環節，高手會告訴你憑感覺加樣連孔都不用看） 

⑦ 連接電源，一定要注意紅對紅，黑對黑，定電壓和時間，上膠（90v，約 40min，maker 分出條帶），換壓，下膠（120v，2h）。（不要讓溴酚藍跑出去）

經驗總結：

想要條帶跑的好看點，最好把上膠稍微配高一點。

換電壓主要是看溴酚藍有沒有跑到下膠，沒有確定的時間點。

膠最好現配現用，如果需要保存最好用濕潤的保鮮膜包好。