基因研究做引物設計，一定要知道轉錄本能干什么！

我們平常通過數據庫查找某個基因的相關信息時，會發現該基因有多個轉錄本。為什么一個基因可以有多個轉錄本呢？轉錄本能干什么？ 

轉錄本其實就是基因通過轉錄形成的一種或多種可供編碼蛋白質的成熟的 mRNA。 

一個基因有可能有多個轉錄本，原因是由于不同的剪接方式造成的。我們都知道，基因轉錄之后，首先是形成前體 mRNA，通過剪切內含子連接外顯子，5’端加帽及 3’端加尾之后形成成熟的 mRNA。 但是在剪切的過程中可能會剪切掉外顯子，也有可能保留部分內含子，這樣就形成了多種 mRNA 即多個轉錄本。

舉個栗子：這是一個三個外顯子兩個內含子的基因結構圖

該圖通過不同的剪接方式得到了四種 mRNA 即四種轉錄本（我只是列出了部分可能性），實際中可能該基因只具有其中的一種或兩種轉錄本，也有可能都具有。 

我們需要特別注意的是大多數基因有多個轉錄本，而且有可能每個轉錄本都會編碼產生相應的蛋白，這樣就有可能造成一個基因有多種功能。 

我們平常研究某個基因時（該基因有多個轉錄本），其實我們研究的是它的其中一個轉錄本所編碼的蛋白的功能。雖然該基因有多個轉錄本，而且每個轉錄本都編碼蛋白，但是一般情況下它的不同的轉錄本分布在不同類型的細胞中，當然也有可能多種轉錄本同時存在于某一細胞中。

那我們研究該基因時應該怎么做呢？ 

首先，我們需要確定我們應該研究該基因的哪個轉錄本。 

因為我們平常研究某個基因的功能的時候，是因為該基因在某一特定的組織和細胞中表達， 它在這些組織和細胞中具有特定的功能，所以我們只需要確定該基因的哪個轉錄本在這些組織和細胞中表達即可。 

確定的方法當然就是設計每種轉錄本特異性引物，然后通過 RT-PCR 就可知道哪種轉錄本在組織和細胞中特異性表達。那這個轉錄本就是我們接下來要研究的。 

之所以要確定我們應該研究哪個轉錄本，那是因為它關系到引物的設計以及蛋白分子量的計算。 

當我們研究某個基因的功能時，通常會抽提總的 RNA，然后反轉錄得到 cDNA，然后將 cDNA 連接到表達載體中轉化到原核或真核細胞中進行表達，然后進行接下來的研究。 

通過反轉錄獲得 cDNA 時，引物的設計就是根據轉錄本設計的。而且之后我們會將表達的蛋白跑電泳后進行分析，那蛋白的大小是如何計算的呢，當然也是通過該轉錄本編碼的蛋白的 氨基酸序列計算的啊。